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本生試劑盒—有關(guān)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線做不好有哪些原因

更新時(shí)間:2023-04-03    點(diǎn)擊次數(shù):7307

  本生試劑盒—有關(guān)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線做不好有哪些原因原因

 

  試劑盒被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定,但測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果,引起測定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:

  (1)試劑盒因素

  (2)標(biāo)本因素

  (3)操作因素

  試劑盒需要注意的事項(xiàng)是:

  1. 在做完整的實(shí)驗(yàn)過儀器之前,儀器預(yù)熱半小時(shí),這個(gè)計(jì)算好時(shí)間,也可以直接將儀器一直開著,直到整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

  2. 在加液過程中不要使槍頭觸及到板子底部,一般槍頭都懸空,可以將槍頭靠在孔邊緣,

  3. 但槍頭尖懸空,如果槍頭上殘留液體看整體多少量,不要吹打下去,特別忌諱在版孔內(nèi)壁流向版孔,整個(gè)加液過程不要產(chǎn)生氣泡(洗滌液除外)。

  試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線做不好的原因分析:

  A、剛加完顯色劑時(shí)梯度明顯,顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。

  B、酶濃度太高,導(dǎo)致zui后顯色結(jié)果都是高的。

  C、包被:酶標(biāo)系統(tǒng)不匹配或者酶標(biāo)的非特異反應(yīng)太強(qiáng),或者酶標(biāo)儀讀數(shù)范圍不夠。

  D、樣本中有能夠催化底物的物質(zhì),沒洗下來。

  建議:包被、酶標(biāo)重新做梯度,先用較低的濃度把梯度摸索好,然后再優(yōu)化靈敏度,zui后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍。

  建議:有條件的話,可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上,加完底物三分鐘讀數(shù)。

  建議:蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話,顯色十分鐘就差不多了。

  建議:酶是自己標(biāo)的這種情況的,HRP比例不要太高。

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